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分析柱(内径4.6毫米)的典型流速(F)为0.5–2ml/分钟。在较高流速(f)下操作会增加色谱柱背压(δp)[1，6]，但会减少分析时间:其中L=色谱柱长度，=流动相粘度，r=色谱柱半径，dp=填料粒径。
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对于等度分析，流速对k或没有影响，因为流速对每种溶质的tR是相同的影响。然而，流速对理论塔板数有显著影响。流速与色谱柱内径的平方成正比，可以通过色谱柱获得相同的线速度。
例如，减少色谱柱直径从4.6到2.1毫米，操作流速应该从1毫升/分钟减少到{1毫升/分钟×(2.12/4.62)}=0.21毫升/分钟，溶剂消耗的显著减少这一点对于使用内径为2.1–3.0毫米的色谱柱从高效液相色谱转换到UHPLC条件的方法非常重要。
较高的柱温(T)会降低流动相的粘度并对保留因子(k)有显著影响，柱效(N)和选择性()也受到一定程度的影响。
Ref.:HPLCANDUHPLCFORPRACTICINGSCIENTISTS,,2019.
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