
细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。
转染方式有瞬时转染:外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。)和稳定转染:(外源DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。)主要方法如下:


影响转染效率的因素有很多,具体如下:
1.转染试剂
要选择高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。
2.细胞状态
一般低的细胞代数(50)能确保基因型不变。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞。
3.细胞密度
细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂,要求转染时的最适细胞密度各不相同。
4.血清
血清的存在会影响DNA-转染复合物的形成,但只要在复合物形成时用无血清培养基或PBS来稀释DNA和转染试剂就可以了。
5.DNA质量
DNA质量对转染效率影响非常大。一般的转染技术基于电荷吸引原理,如果DNA不纯,如带少量的盐离子,蛋白,代谢物污染都会影响转染复合物的形成及转染的进行。
